1、染色過強(qiáng)的原因及解決辦法：抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體)抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4℃過夜孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃DAB顯色時(shí)間過長(zhǎng)或DAB濃度過高顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)。

  2、非特異性背景染色的原因及解決辦法：操作過程中沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時(shí)間延長(zhǎng)組織中含內(nèi)源性生物素正常非免疫動(dòng)物血清再封閉血清蛋白封閉不充分延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間。

  3、染色弱的原因及解決辦法：抗體濃度過低，孵育時(shí)間過短提高抗體濃度，孵育時(shí)間不能少于60分鐘試劑超過使用效果使用期及時(shí)更換試劑。操作中，滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋，每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)室溫太低，低于15℃，若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過夜)蛋白封閉過度，封閉時(shí)間不要超過10分鐘。

  4、染色陰性的原因及解決辦法：操作步驟錯(cuò)誤，重新試驗(yàn)，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照，組織中無抗原，設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照片，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤，仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤。